蛋白(bai)類(lei)藥物(wu)(wu)如單克隆抗體(ti)和抗體(ti)偶聯(lian)藥物(wu)(wu)因具有極佳的(de)治療效(xiao)果與靶向作用正以火箭般的(de)速度(du)飛速發(fa)展，但這些藥物(wu)(wu)為患(huan)者帶(dai)來(lai)健康的(de)同時，也(ye)為藥品研(yan)發(fa)人員帶(dai)來(lai)更大的(de)壓力。因其(qi)在(zai)諸(zhu)多(duo)環(huan)境暴露下的(de)不穩定性，需要制藥科學家(jia)們對藥物(wu)(wu)質量進行持續監控(kong)，以滿足(zu)生產和臨床(chuang)需要。蛋白(bai)質在(zai)制備，生(sheng)產(chan)和運輸存(cun)儲過程中(zhong)可能面對(dui)著(zhu)如凍(dong)融(rong)，高溫和震(zhen)蕩的(de)多(duo)重壓力，隨之而來(lai)的(de)是對(dui)蛋白(bai)聚集體增多(duo)的(de)擔憂。蛋白聚集會影(ying)響藥物安全(quan)，嚴(yan)重的蛋(dan)白聚(ju)集還(huan)可能(neng)增(zeng)加對患者的免(mian)疫源性風險。令人欣慰的(de)是，分子(zi)排(pai)阻色(se)譜法作為監控蛋白類(lei)藥物聚集體的(de)有效檢測手(shou)段已經成為(wei)一項金標準。我(wo)們使用ZF-LC-0001分子排阻色譜（SEC-HPLC）通用流動相對單克隆抗體與抗體偶(ou)聯藥物進行分析,獲(huo)得了令(ling)人非(fei)常(chang)滿意的效果。

目(mu)前SEC-HPLC方(fang)法已經(jing)標準化，研究人員可以根據蛋白分(fen)子量選擇(ze)標準的(de)商業化色譜(pu)柱進行定(ding)量分(fen)析，但流動相的選擇通常依賴經(jing)驗。這些(xie)流動相一(yi)般為(wei)含鹽的水溶液，調配到一(yi)定的pH值后再進行(xing)分(fen)析。然而(er)含鹽(yan)流動(dong)相在SEC-HPLC分析過程中(zhong)會面臨容易(yi)長(chang)菌(jun)的問(wen)題，雖然在(zai)流(liu)動相(xiang)中(zhong)加入(ru)0.5-1M氯化鈉會產生一定的抑菌效果，但效果有(you)限且可(ke)能帶來鹽(yan)析堵塞儀(yi)器的風險。部(bu)分研究(jiu)人員還會選(xuan)擇在流(liu)動相(xiang)中加入少許疊氮化鈉來抑制細菌生長，但隨著化學品(pin)監管(guan)逐(zhu)漸(jian)嚴格，這(zhe)項手段(duan)(duan)也成為不可能。在蛋(dan)白藥物(wu)研發階(jie)(jie)段(duan)(duan)，如預制(zhi)劑處方開發階(jie)(jie)段(duan)(duan)，往往需(xu)要(yao)進行多處方篩選設計與(yu)全(quan)面(mian)(mian)的(de)應力實(shi)驗，這(zhe)些應力實(shi)驗包括高溫、凍融、光(guang)照與(yu)振蕩，實(shi)驗的(de)全(quan)面(mian)(mian)設計會帶來分析量的(de)增加，如一次(ci)頭碰頭SEC-HPLC分析會大于200個樣本(ben)（N=3），這使得液(ye)相分析的時(shi)間(jian)大于4天(tian)。通常，一個序列(lie)的分析(xi)中間不可以中斷(duan)，若意(yi)外(wai)中斷(duan)會帶來新的校準和系(xi)統平(ping)衡，且中斷(duan)前的數據仍需要(yao)進行質量(liang)保證評(ping)估(gu)才可以使用。為了解決這一問題，舟(zhou)帆生物(wu)新推出(chu)了一款SEC-HPLC通用流動相(xiang)（貨號：ZF-LC-0001），可以滿足(zu)樣(yang)品的持(chi)續分析，常規條件下十天之內不會影響分析。

1. SEC流動相抑菌效力(li)對比

按照常規配方進行配比制備本次實驗所(suo)用(yong)不含舟帆生物特(te)有配方流(liu)動相(xiang)。分別將對照組與(yu) ZF-LC-0001流動(dong)相（1×）罐(guan)裝至干凈透透明的1L流(liu)動相瓶(ping)中(zhong)，分別于0, 1, 2, 5, 10天時拍照留樣，記錄圖片如(ru)圖1所示。與(yu)對(dui)照組流動相相比，ZF-LC-0001流動相顯(xian)示(shi)出優異(yi)的抗菌效力。結(jie)果顯(xian)示(shi)對照組流動相于第1天即出現肉(rou)眼可見異物，并(bing)于第2天現象加重，第5天取樣與第10天取樣拍照(zhao)后發現兩者狀(zhuang)態(tai)相似。ZF-LC-0001流動相直至(zhi)第10天(tian)仍然(ran)保持(chi)清澈透明。此留樣階段的流動相被用于后(hou)面實驗的分析。

圖(tu)1. 常(chang)規流動相與舟帆生物 ZF-LC-0001 流動相抑菌效力對比(bi)

2. 日內(nei)精密(mi)度與日間精密(mi)度分析

使用ZF-LC-0001在常規分(fen)析環(huan)境下放置10天后的流動相，對重組抗人(ren)ER2抗體因子(zi)單克隆

抗(kang)體(ti)樣品(pin)進行日內精(jing)密度與(yu)日間(jian)精(jing)密的(de)分(fen)析見圖(tu)2。數據(ju)表明流動相(xiang)在放置10天后仍然有非常(chang)好的日(ri)(ri)內精密度(du)與日(ri)(ri)間精密度(du)：[保(bao)留時(shi)間（Time）與總峰(feng)面積(mAU)分別為圖A, C]，以區分序列間日內的精密度。后3份于(yu)第2日進(jin)樣一個輪次，與第1日第二輪次進樣進行日間精密(mi)度的對比（保(bao)留時(shi)間與總峰面積分別(bie)為圖B, D）。

圖2. 舟帆生物ZF-LC-0001流動相日內精密度(du)和日間精密度(du)

3. 數據準確(que)性高

使用ZF-LC-0001分(fen)析重組抗人(ren)ER2抗(kang)體因子單(dan)克隆抗(kang)體8個進樣量梯度(du)的過程(cheng)，R2=0.9999，數據(ju)(ju)表明，在儀器(qi)最大分析限度內，進樣梯度的(de)變化(hua)對數據(ju)(ju)的(de)準確性(xing)影響較小(xiao)。

圖(tu)3. 舟帆生物(wu)ZF-LC-0001流動(dong)相線性及進樣量與總峰面積數據

4. 廣泛的樣品兼(jian)容性

使用(yong)ZF-LC-0001分析了5個(ge)單克隆抗體與2個抗體(ti)偶(ou)聯藥物的分子排阻色譜，我們將(jiang)7個蛋白藥物(wu)全部使用純水稀釋至1mg/mL，統一進樣，結(jie)果如圖4所示，表明了ZF-LC-0001流動相無論(lun)在(zai)一般的(de)(de)單(dan)克隆抗(kang)體(ti)(ti)藥(yao)物或是疏水(shui)性較強的(de)(de)抗(kang)體(ti)(ti)偶聯藥(yao)物中(zhong)均可(ke)以(yi)達(da)到普適(shi)性分(fen)(fen)析(xi)的(de)(de)效(xiao)果，并且對(dui)于低濃度進樣，蛋(dan)白聚集(ji)體(ti)(ti)與(yu)單(dan)體(ti)(ti)仍然顯示出極(ji)好的(de)(de)分(fen)(fen)離度和(he)分(fen)(fen)辨率。

圖4. 5種單克隆抗體與(yu)2種抗體(ti)偶聯藥物在低(di)濃度下進樣(yang)的(de)SEC色譜圖

5. 改善(shan)分析圖譜

除(chu)此之外，與常規(gui)流動相比，使用ZF-LC-0001能獲(huo)得更加完美的峰(feng)形，如圖5所示，峰寬更(geng)窄，拖尾(wei)得到(dao)改善，這樣可有效避免為減少拖尾(wei)向流動相中加(jia)入有機溶劑，從而進一步(bu)避免溶液鹽(yan)析堵塞分析系統(tong)，造成(cheng)序列意外終止的風險。

圖5. 使(shi)用ZF-LC-0001與常規高鹽流動相的SEC色譜圖(tu)對比（樣品分(fen)別為2種mAb與(yu)2種(zhong)ADC藥物）

綜上所述(shu)，舟(zhou)帆生(sheng)物(wu)新推出的SEC-HPLC通用流動相（貨號：ZF-LC-0001）具有以(yi)下(xia)突出(chu)優勢：

• 卓(zhuo)越的抗(kang)菌能力，有效保護貴重(zhong)儀(yi)器與高價值耗材不會在分析過程中受損；
• 優異的穩定性，在分析(xi)條件下(xia)放置10天(tian)后仍能達(da)到令人滿意的日(ri)內和(he)日(ri)間穩(wen)定性與可觀的線(xian)性數(shu)據；
• 廣泛的樣品兼容性，適用于分析(xi)單抗、ADC、重(zhong)組蛋(dan)白(bai)與多肽(tai)（此部分數據(ju)未展(zhan)示）等多種蛋(dan)白(bai)類藥物(wu)；
• 改善圖譜峰型，優化拖尾(wei)問題；
• 使用(yong)方便，對人(ren)體(ti)無(wu)毒害且環境友好。

產品(pin)訂購(gou)信(xin)息(xi)：

試用申請：

SEC通用流動相試用裝（100ml）火熱申請中，如您對上述產品感興趣，請關注“西美杰微信公眾號”，發送關鍵詞“SEC”，填寫問卷即可獲得免費試用機會，數量有限，先到先得！

杭(hang)州(zhou)舟帆(fan)生(sheng)物科技有限公(gong)司成立于2018年，擁(yong)有一支(zhi)高效的研發(fa)團(tuan)隊，是(shi)一家專(zhuan)注于(yu)生物科(ke)(ke)技領域(yu)的公司(si)。公司(si)在蛋白質(zhi)藥品工藝開發(fa)和(he)優化、分(fen)子診斷等(deng)領域(yu)擁(yong)有豐富的經驗和(he)技術(shu)優勢(shi)。我們的產(chan)品包括商業化毛細管(guan)凝膠(jiao)電泳(yong)檢測試(shi)劑(ji)盒、高效液相色譜(pu)離子交(jiao)換檢測試(shi)劑(ji)盒、細胞(bao)培養試(shi)劑(ji)、分(fen)子診斷試(shi)劑(ji)等(deng)。這些產(chan)品廣泛(fan)應(ying)用(yong)于(yu)生命科(ke)(ke)學研究、藥物開發(fa)等(deng)領域(yu)，與眾(zhong)多知(zhi)名研究機構和(he)企(qi)業建(jian)立了緊密的合(he)作關系，共同推動生物科(ke)(ke)技的發(fa)展和(he)應(ying)用(yong)。

參考(kao)文(wen)獻：

Liu JZ, Li L, Fang WJ*. A novel size exclusion chromatography method for the analysis of monoclonal antibodies and antibody-drug conjugates by using sodium iodide in the mobile phase. Pharm Res, 2024, in press.