正確的洗板(ban)操作(zuo)對于降低ELISA實驗(yan)中的變異和消除(chu)背景干擾(rao)至關重要。如果(guo)您正在(zai)使(shi)用自(zi)動化(hua)洗(xi)板設備或實驗(yan)結果(guo)的變異程度高于預期，希望以下文(wen)章(zhang)和視頻能幫助(zhu)您優化(hua)實驗(yan)流(liu)程，確(que)保(bao)實驗(yan)結果(guo)回歸正常。
手動洗(xi)板的優點
雖(sui)然ELISA洗板(ban)的目的是(shi)去除未(wei)結合的反(fan)應物，但(dan)過度(du)洗板(ban)會不同程度上(shang)導致抗體與目標蛋白解離，從而(er)導致吸(xi)光值偏(pian)低和%CV值偏(pian)高(gao)。此外(wai)，殘留液體去除不完全（通常發生在(zai)自(zi)動洗板設(she)備中）也會導致(zhi)更高的檢測(ce)背景，這些(xie)對HCP ELISAs檢測尤為不利，因為其(qi)本身就具有較高(gao)的基(ji)線吸光值。
因此，Cygnus專(zhuan)家建(jian)議在使用Cygnus ELISA試(shi)劑(ji)盒時盡量采用手動洗板的方法。該方法簡(jian)便(bian)易學，無需任何特殊設備(bei)。只要準備(bei)一(yi)些低(di)纖維吸(xi)水(shui)紙和一(yi)個洗瓶就(jiu)可(ke)輕松操(cao)作，需要(yao)注意的是(shi)洗瓶的出(chu)水(shui)口要(yao)修(xiu)剪成大(da)開口斜面以(yi)確保(bao)洗液的充分流動與合適(shi)的沖(chong)洗力度。
修剪洗瓶(ping)出水(shui)口
準備工作：稀釋(shi)洗滌(di)液并準備好洗板操作區域
用蒸餾水將20×的濃縮洗滌液稀釋至1×洗滌液裝入(ru)洗瓶內，將吸水(shui)紙鋪開放在水槽旁(pang)邊(bian)干凈的工作臺上。
注：請勿使用(yong)除ELISA試劑盒(he)提供之(zhi)外的其他洗(xi)滌液，這樣可能會(hui)影(ying)響實(shi)驗結果。
第一步：倒出(chu)ELISA孔板(ban)內的液體
用拇指(zhi)按住(zhu)ELISA板一側(ce)(ce)的中間位置，用食指(zhi)按住(zhu)另一側(ce)(ce)，從底(di)部托(tuo)起(qi)ELISA板。可(ke)以用拇指(zhi)和食指(zhi)扣住(zhu)孔(kong)板(ban)(ban)(ban)條或板(ban)(ban)(ban)條兩(liang)端的標簽，以避免(mian)板(ban)(ban)(ban)條從板(ban)(ban)(ban)托中掉出(chu)。在水槽上方迅速(su)翻轉孔板(ban)，借助手臂的力量快速向下(xia)移動并突(tu)然停(ting)止，動作要連貫，讓液體借(jie)助(zhu)慣性從孔板內甩入(ru)水(shui)槽(cao)。在(zai)操作正確的情況下，手(shou)指、孔板條(tiao)和板托外側(ce)不應沾上(shang)任何液(ye)體。然后(hou)重復(fu)這個(ge)傾倒動作(zuo)一次(ci)。
注(zhu)：如(ru)果(guo)擔心孔板(ban)條從板(ban)托(tuo)中掉(diao)出，可(ke)以在每個孔板(ban)條上提前標注好位置。
第(di)二(er)步：用吸水紙吸干殘(can)留(liu)液體，然后輕輕拍板
立即將倒(dao)扣的孔板(ban)按壓在吸水(shui)紙上，并將(jiang)孔板(ban)移至吸(xi)水紙(zhi)未使用的區域，輕輕拍板三次，每一次(ci)拍(pai)板(ban)都(dou)要在吸(xi)水紙未使用(yong)的區域。不要用力拍板，如果拍板力度過大(da)會在板上傳遞不(bu)均(jun)勻(yun)的沖擊能量(liang)，致(zhi)使抗體(ti)/分析物(wu)復合物(wu)的解離。
第三步：清洗孔板
用裝有1×洗滌(di)液(ye)的洗瓶，從板的上邊(bian)一側開始，將(jiang)洗滌(di)液(ye)逐(zhu)個填滿所有孔到溢出，直(zhi)至最后一個孔，然(ran)后再按(an)照(zhao)步驟1和2的(de)方法(fa)丟棄(qi)洗滌(di)液(ye)并輕輕拍板。
注：不(bu)用擔心洗滌液從孔內溢出(chu)，但(dan)要避(bi)免洗(xi)滌液在孔內長時(shi)間浸泡(pao)。
重(zhong)復上述步驟(zou)3次，總共進行4次洗板操作(zuo)。需要注意的是，在第(di)2次(ci)和(he)第(di)4次(ci)洗板時，要從(cong)板的下邊一(yi)側反方向逐孔加入洗滌液(ye)。這樣操(cao)作可以確保所(suo)有孔的洗滌液(ye)總浸(jin)泡(pao)時間基本相同。另外，無需額外增加洗板次(ci)數，這(zhe)樣可(ke)能會使結合(he)在(zai)抗體上的分析(xi)物(wu)解離，導(dao)致檢(jian)測靈敏度降低。
最后一次洗板后，還是按照(zhao)步驟1和2所述的方法吸干/輕拍(pai)吸水紙。然后將ELISA板倒扣在(zai)吸(xi)水紙上靜置約(yue)20秒(miao)，以(yi)便徹底(di)排干殘(can)留液體，最后再在(zai)吸水紙(zhi)上拍板4次。
注：每次(ci)拍板后，孔板最好能在手中(zhong)水平(ping)旋轉(zhuan)180度(du)，這樣可以確保板兩(liang)端的受力更加均(jun)勻。
第四步：擦干(gan)多(duo)余液體
用干凈的(de)吸水紙擦拭孔板的(de)底(di)部外(wai)部，清除殘留的(de)洗滌液。最(zui)后將洗好的(de)ELISA板放(fang)回到實驗操作臺并加入底(di)物。
注：不(bu)要讓孔板(ban)徹(che)底晾(liang)干，否則(ze)酶的活性將會(hui)受到影響。底物(wu)要遠離水槽(cao)，因為洗板(ban)過程(cheng)可(ke)能會(hui)產生氣(qi)溶膠，導致孔板(ban)或者底物(wu)被(bei)污染(ran)，影響檢測(ce)結果。
最后，請觀(guan)看以下洗板操作視(shi)頻(pin)，幫助(zhu)您快速掌握這一精(jing)確的技(ji)術！
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