為什(shen)么要驗(yan)證HCP抗(kang)體(ti)覆(fu)蓋(gai)率？
在(zai)對工藝(yi)中HCP（宿主細胞蛋(dan)白）的監控(kong)和(he)產(chan)品放行(xing)中，ELISA一(yi)直被用作HCP檢(jian)測的金標準(zhun)。這(zhe)主要是因為(wei)ELISA可(ke)以在mg/ml級別(bie)的產品蛋(dan)白中有效地檢(jian)(jian)測(ce)ng/ml級別(bie)的HCP殘留。并且ELISA的操作簡便，是經典的免疫學檢(jian)(jian)測(ce)方法。但ELISA檢(jian)(jian)測HCP也有(you)方法的(de)(de)局限性(xing)，比如(ru)不能從ELISA的(de)(de)結果(guo)中(zhong)知道樣品中(zhong)有(you)哪些HCP，或者(zhe)用于(yu)ELISA檢(jian)(jian)測的(de)(de)抗體(ti)與哪些HCP發生了免(mian)疫反應。因此，監管部(bu)門(men)要(yao)求在使用ELISA檢測(ce)過程中HCP殘留含量時(shi)，不僅要(yao)通過方法(fa)學驗(yan)證證明試劑(ji)盒的準確(que)度，精密度，靈敏度等(deng)，而且還(huan)需要(yao)證明使用的HCP抗(kang)體(ti)有(you)廣泛的反(fan)應性，即(ji)HCP抗(kang)體(ti)覆蓋率(lv)。
AAE是(shi)檢測HCP抗體(ti)覆蓋率的更有(you)效方(fang)法
2014年，作為過程污染物殘留檢測產品領先開發商(shang)，Cygnus結合多年HCP抗(kang)體及試劑(ji)盒開發經驗，推出了Affinity Antibody Extraction（AAE）方法驗(yan)證(zheng)覆蓋(gai)率(lv)，突破了傳統(tong)2DWB方法(fa)驗(yan)證(zheng)覆蓋(gai)率(lv)的局限性(xing)，更真實準確反應HCP抗(kang)體覆蓋(gai)率(lv)。AAE提取富集的(de)樣品(pin)和未(wei)經AAE提取的樣品分(fen)別經(jing)過2D PAGE分離后使(shi)用銀染的(de)(de)方法對得(de)(de)到的(de)(de)點進(jin)行匹配、計(ji)數(shu)、計(ji)算覆蓋率。這種方法一經上市后，廣泛(fan)得(de)(de)到生物(wu)制藥企業和監控(kong)部門的(de)(de)認可(ke)。
AAE+MS更清晰地展示了工藝(yi)中(zhong)HCP殘留情況，進一步(bu)對(dui)產品質量安全做風險評估
現階段，常用(yong)的HCP抗體(ti)覆(fu)蓋率(lv)驗證(zheng)的方法都存在其自身的局限(xian)性(xing)。AAE方法(fa)解決了(le)傳統(tong)2DWB中的低靈敏度和低特異性的問(wen)題。而且，由(you)于AAE可(ke)以在富(fu)集本(ben)身含量較低(di)的(de)HCP的(de)同時(shi)，還可(ke)以大幅(fu)降低(di)中間品和終(zhong)產品中的(de)藥物蛋白(bai)。這(zhe)使對中間品和終(zhong)產品中HCP與HCP抗體(ti)的(de)反應情況的(de)分(fen)析成為可(ke)能。盡(jin)管如此，AAE和銀染分析也不能具體(ti)得知樣(yang)品中具體(ti)有(you)哪些種類(lei)的(de)HCP，尤其是那些與人體(ti)有(you)較(jiao)高免疫原性和對(dui)藥物有(you)較(jiao)大影響的(de)HCP。基于(yu)以上問題的(de)考慮(lv)，Cygnus利(li)用更(geng)精準的質譜(pu)檢測方法(fa)與AAE相結(jie)合，推出了(le)新一(yi)代(dai)的AAE和Mass Spectrum覆蓋率驗證服務。
AAE與Mass Spectrum可對上游和下游工藝中的樣品進行分析，覆蓋率的結果更高、更真實。更主要的(de)是質譜可(ke)以對樣品中是否存(cun)在潛在高風(feng)險的(de)HCP做出(chu)鑒定并提供這些蛋白相關(guan)含量(liang)，分子量(liang)，等電點等信息。無論是藥物研發人員，還是監管(guan)人員都可以(yi)對某(mou)個(ge)工藝中HCP殘留(liu)情況有清楚的了解(jie)，從而做出更(geng)好的(de)判斷。
北京西美杰科技(ji)有限公(gong)司是美國Cygnus Technologies公(gong)司(si)中(zhong)國(guo)區總代理，負(fu)責銷售Cygnus全(quan)線產品(pin)(pin)以(yi)及(ji)覆蓋(gai)率驗證(zheng)，專屬試劑(ji)盒定制等服(fu)務，并提(ti)供產品(pin)(pin)和服(fu)務售前和售后技術支持、服(fu)務樣品(pin)(pin)寄送、進度跟(gen)蹤、服(fu)務報告整(zheng)理等一站式服(fu)務。如感興趣請撥(bo)打西美杰熱線電話：400-050-4006。
